The objective of this study was to determine the effects of GDF-9, IGF-I, and GH alone or combined on preantral follicle survival, activation and development after 1 and 7 days of in vitro culture. Either fresh (non-cultured) or cultured ovarian tissue was processed for histological and fluorescence analysis. For all media tested, the percent of normal follicles was greater when compared to minimum essential medium supplemented (MEM+) alone, except when ovarian tissue was cultured with GDF-9/IGF-I or GDF-9/GH (P < 0.05). Fluorescence analysis showed that the percent of viable follicles after 7 days of culture was similar for non-cultured tissue and for all treatments tested. The percent of primordial follicles was reduced (P < 0.05) and there was a significant and concomitant increase in the percent of intermediate and primary follicles in all treatments tested after 7 days of culture when compared to non-cultured tissue. After 7 days of culture, the highest percent of intermediate follicles was observed with IGF-I/GH (61.3%), and the highest percent of primary follicles was achieved with IGF-I (57.7%). After 7 days of culture in MEM+ containing GDF-9, IGF-I and GH alone or in all associations, a significant increase in follicular diameter was observed when compared to MEM+ alone and non-cultured tissue. In conclusion, GDF-9, IGF-I and GH alone or in combination maintain preantral follicle survival and promote primordial follicle activation. Nevertheless, the data showed that IGF-I/GH and IGF-I alone are efficient in promoting the transition from primordial to intermediate follicles and from intermediate to primary follicles, respectively.

Os efeitos do α-tocoferol e da ternatina sobre morfologia, ativação e crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro, por um ou cinco dias, foram avaliados. Os fragmentos ovarianos foram imediatamente fixados (controle não-cultivado) ou cultivados in vitro, por um ou cinco dias, em Meio Essencial Mínimo (MEM) com ou sem suplementação com α-tocoferol ou ternatina nas concentrações de 5, 10 ou 15µM, formando os tratamentos MEM, TOC5, TOC10, TOC 15, TER5, TER10, TER15. O percentual de folículos pré-antrais normais no controle não-cultivado foi de 73,2%, depois de cinco dias de cultivo, houve redução desse percentual em todos os tratamentos, quando comparados com o controle não-cultivado (P<0,05). O cultivo por cinco dias aumentou a ativação folicular em todos os tratamentos (P<0,05). A análise ultra-estrutural não mostrou folículos pré-antrais íntegros após cinco dias de cultivo em meio contendo antioxidantes. Concluiu-se que o α-tocoferol e a ternatina podem promover a ativação folicular, no entanto a adição desses antioxidantes nas concentrações testadas reduziu a viabilidade folicular após o cultivo in vitro.

The effects of α-tocopherol and ternatin on the morphology, activation, and growth of goat preantral follicles in vitro cultured, for one or five days, were evaluated. Ovarian fragments were immediately fixed (non-cultured control) or in vitro cultured for one or five days in Minimum Essential Medium (MEM) with or without α-tocopherol or ternatin supplementation, both at concentrations of 5, 10, or 15µM, corresponding to the following treatments: MEM, TOC5, TOC10, TOC 15, TER5, TER10, and TER15. The percentages of morphologically normal preantral follicles in non-cultured ovarian tissue (control) was 73.2% and after five days of culture, there was a decrease on these percentages in all treatments (P<0.05) when compared with non-cultured control. Culture of ovarian cortex for five days increased the percentages of follicular activation in all treatments (P<0.05). Ultrastructural analysis did not confirm the integrity of caprine preantral follicles cultured for five days in medium containing antioxidants. This study demonstrated that α-tocopherol and ternatin can promote follicular activation; however, addition of these antioxidants in the tested concentrations reduced the follicular viability after in vitro culture.

Avaliou-se o efeito da adição de diferentes tipos e concentrações de soro sobre o desenvolvimento e a sobrevivência de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) caprinos in vitro. Além disso, verificou-se a relação entre as concentrações de nitrito presentes no meio de cultivo e a viabilidade folicular. Cada par ovariano foi dividido em 29 fragmentos, sendo um destinado ao controle. Os fragmentos foram cultivados por um ou sete dias em meio essencial mínimo suplementado (MEM+) ou MEM+ com diferentes concentrações (10 ou 20%) de soro fetal bovino (SFB), soro de cabra em estro (SCE) ou soro de cabra em diestro (SCD). Na análise morfológica após sete dias, apenas o tratamento com 10% de SFB apresentou percentual de FOPA normais similar ao MEM+ (P>0,05). A análise ultra-estrutural dos folículos cultivados por sete dias com MEM+ ou MEM+ com 10% de SFB mostrou danos oocitários, porém células da granulosa normais. A análise do meio de cultivo revelou correlação positiva entre a viabilidade folicular e a produção de nitrito. A suplementação com soro não melhorou a viabilidade de FOPA e a concentração de nitrito no meio de cultivo funcionou como um indicador da viabilidade das células da granulosa de FOPA caprinos cultivados in vitro.

The effect of the addition of different types and concentrations of sera on the viability and development of caprine preantal follicles (PAF) in vitro cultured was analyzed. In addition, it was evaluated the correlation between nitrite concentrations in culture medium and folicular viability. Each ovarian pair was divided in 29 fragments and one was used as control. The fragments were cultured for one or seven days in minimal essential medium (MEM+) or MEM+ with different concentrations of (10 or 20%) bovine fetal serum (BFS), estrous goat serum (EGS), or diestrous goat serum (DGS). After seven days, the morphological analysis showed that only the treatment with 10% BFS maintained the percentage of normal PAF similar to MEM+ (P>0.05). The ultrastructural analysis of follicles cultured for seven days in MEM+ or MEM+ with 10% BFS showed some oocyte damage, although the granulosa cells were normal. Analysis of culture medium revealed a positive correlation between follicular viability and nitrite production. Supplementation with serum did not improve the viability of PAF and nitrite levels in culture medium served as an indicator of viability of granulose cells from caprine PAF in vitro cultured.

Investigou-se a eficiência da solução salina 0,9% (SS) e TCM 199 na conservação de folículos pré-antrais (FOPA) bovinos in situ em diferentes temperaturas e tempos de incubação. Cada par ovariano foi dividido em 25 fragmentos. Um fragmento foi escolhido aleatoriamente e fixado imediatamente após a coleta (controle). Os demais foram distribuídos em tubos contendo SS ou TCM 199 a 4, 20 ou 39ºC por 2, 4, 12 ou 24h. A análise histológica mostrou que a conservação a 4ºC em ambas as soluções manteve a porcentagem de FOPA normais similar ao controle. A conservação em SS a 20ºC por 12 ou 24h, TCM 199 a 20ºC por 24h e em ambas as soluções a 39ºC a partir de 2h aumentou (P<0,05) a porcentagem de FOPA degenerados comparada à porcentagem de folículos-controle. Em ambas as soluções, independente do tempo de incubação, a porcentagem de folículos normais, após conservação a 39ºC, foi (P<0,05) menor que a obtida com 4 e 20ºC. FOPA bovinos podem ser conservados eficientemente a 4ºC por até 24h em ambas as soluções, e a 20ºC por 4 e 12h em SS e TCM 199, respectivamente.

The efficiency of 0.9% saline solution (SS) and TCM 199 on the preservation of bovine preantral follicles (PF) in situ at different temperatures and incubation times was investigated. Each ovarian pair was divided into 25 fragments. One fragment was taken randomly and immediately fixed (control). The other fragments were distributed in tubes containing SS or TCM 199 at 4, 20 or 39ºC for 2, 4, 12 or 24h. The histological analysis showed that the storage at 4ºC in both solutions kept the percentage of normal follicles similar to control values. Preservation in SS at 20ºC for 12 or 24h, TCM 199 at 20ºC for 24h and in both solutions at 39ºC from 2 h onward (P<0.05) increased the percentage of degenerated follicles when compared with control. In both solutions, independent of incubation time, the percentage of normal follicles observed at 39ºC was (P<0.05) lower them those observed at 4 and 20ºC. Bovine PF can be preserved efficiently at 4ºC for up to 24h in both solutions, at 20ºC for 4 and 12h in SS and TCM 199, respectively.

Comparou-se o bloqueio da musculatura extrínseca do bulbo ocular com três doses de atracúrio em cães submetidos à anestesia inalatória sob ventilação espontânea. Em estudo cego, foram utilizados seis cães, pré-medicados com 0,1mg/kg de acepromazina intravenoso (IV), anestesiados com 5mg/kg de propofol, entubados e mantidos sob anestesia inalatória com 1,5% de isofluorano e submetidos a quatro tratamentos: não tratados (controle), tratados com 25µg/kg (G25) de atracúrio IV, com 50µg/kg (G50) de atracúrio IV e com 75µg/kg (G75) de atracúrio IV. Mensuraram-se: pressão parcial de CO2 expirado (ETCO2), freqüência cardíaca (FC), freqüência respiratória (<FONT FACE=Symbol>¦</FONT>), saturação arterial de oxiemoglobina (SatO2) e tempo de centralização do bulbo ocular. Nos grupos tratados com atracúrio, o ETCO2 aumentou aos 5min, e permaneceu aumentado até 10min em G50 e até 20min em G75, sendo este o único tratamento cuja concentração de ETCO2 apresentou-se acima de 50mmHg. Não houve reinalação de CO2 em nenhum grupo. Em G75, observou-se aumento crescente da <FONT FACE=Symbol>¦</FONT> até os 40min e considerável bradicardia após 10min; ambos retornaram aos valores basais após esse período. A centralização do bulbo ocular foi crescente de acordo com a dose: G25, 38±13min; G50, 65±16,4 min; G75, 78±27min, mas não houve diferença estatística entre G50 e G75. Conclui-se que G50 apresentou bloqueio satisfatório sem promover intensa e prolongada hipercapnia nos animais.

The ocular bulb extrinsic musculature blocking by the administration of three atracurium doses in isoflurane anesthetized dogs under spontaneous breathing was compared. In a blind study, six dogs were premedicated with 0.1mg/kg of acepromazine, anesthetized with 5mg/kg of propofol, intubated and maintained in inhalation anesthesia with 1.5% of isoflurane in 100% of oxygen. Afterwards, they were submitted to four treatments (control, G25:25µg/kg of atracurium IV, G50:50µg/kg IV and G75:75µg/kg IV). Heart rate (HR), breathing rate (BR), CO2 extrated (ETCO2), arterial saturation of oxyhaemoglobin (SatO2) and ocular bulb centralization time were measured. ETCO2 in all animals were increased at 5min keeping high until 10min in G50 and until 20min in G75 dogs; this was the unique animal group that showed results above 50mmHg of ETCO2. CO2 was not reinhaled by any animal. It was observed an increase in BR until 40min and a considerable bradycardia after 10min in G75 animals; both returned to basal levels thereon. The centralization time was crescent, according the doses (G25: 38±13min; G50: 65±16.4min; G75: 78±27min), but no difference between G50 and G75. It was showed that G50 dogs took a content ocular centralization without intense and prolonged hypercapnia.

Determinou-se a ação inflamatória aguda do tiopental intraperitoneal (IP) utilizando-se 72 ratos, divididos em grupo-tratado (40mg/kg de tiopental a 2,5% IP) e grupo-controle (0,25ml de solução fisiológica IP). Para determinar o processo inflamatório, colheu-se o lavado peritoneal às 2, 6, 12, 24 e 48h após a inoculação. Os animais foram anestesiados com isoflurano e submetidos à eutanásia por secção dos vasos cervicais. Administraram-se 5ml de solução fisiológica heparinizada por via IP e, após homogeneização, divulsionou-se o peritôneo e colheu-se a amostra. Determinaram-se a dosagem de proteínas plasmáticas (PP), a contagem global (CGL) e a diferencial (CDL) de leucócitos. Não foi observada diferença na PP entre os grupos em nenhum momento exceto às 2h. Entre os momentos, a dosagem foi superior às 6 e 12h nos dois grupos. Não houve diferença entre os grupos para a CGL. Entre os momentos, a CGL diferiu dos demais às 6h em ambos os grupos. Verificou-se o mesmo perfil para a CDL entre os grupos exceto para os eosinófilos às 6h. Entre os momentos, os valores foram diferentes em relação aos neutrófilos em ambos os grupos, às 6 e 12h. Observou-se reação inflamatória aguda no processo provavelmente desencadeada pela ação mecânica da injeção. A eosinofilia observada no grupo-tratado após 6h sugere uma certa ação irritante do tiopental.

The acute inflammatory action of thiopental intraperitoneal (IP) in rats was studied. Seventy two animals were divided in treated (40mg/kg of thiopental, 2.5% IP) and control (0.25ml of saline solution IP) rats. In order to evaluate the inflammatory process, peritoneal fluid was taken at 2h, 6h, 12h, 24h e 48h after drug administration. The animals were anesthetized with isoflurane and submitted to euthanasia through cervical vessels section. Five millilitres of heparinized saline solution were injected IP, homogenized by abdomen massage and then withdrawn. Plasma protein (PP), global leukocyte count (GLC) and differential leukocyte count (DLC) were analysed. No difference in PP intergroup at any moment was observed, but at 2h. Intragroup, PP was higher between 6 and 12h in both groups. There was no statistical difference of GLC intergroup. There was a difference (P<0.05) of GLC results between groups at 6h post-injection. There was a similar pattern of DLC intergroups, except eosinophil cells at 6h. Intragroup cell counts of neutrophils were different (P<0.05) in both groups at 6 and 12h. The acute inflammatory reaction observed was probably trigged by the mechanically action of injection. The eosinophilia observed in treated group after 6h suggests some irritant action of thiopental.